La Reazione Polimerasica a Catena (Polymerase Chain Reaction - PCR) ha risolto con semplicità ed eleganza il problema di amplificare acidi nucleici presenti in minime concentrazioni in un campione biologico. Per il passo successivo, la rivelazione delle sequenze amplificate, sono state impiegate fino ad oggi sonde ad ibridazione coniugate a traccianti enzimatici.
Nonostante l’elevata specificità e le ottime prestazioni generali, l’impiego delle sonde enzimatiche richiede, per sua natura, tempi lunghi; inoltre, il maggior numero di passaggi previsti da questa tecnologia influenza inevitabilmente l'accuratezza dei risultati. La PCR eseguita sul sistema Cobas TaqMan 48, la nuova piattaforma di Roche Diagnostics per la diagnostica molecolare in Real Time, è assolutamente innovativa e supera di una generazione tutte le tecniche analitiche precedenti, in quanto la rivelazione del target avviene contemporaneamente alla sua amplificazione, riducendo di due terzi i tempi di analisi; inoltre la quantificazione non è colorimetrica, ma utilizza un tracciante fluorescente per raggiungere un intervallo dinamico estremamente ampio.
Nell’esecuzione di un test in Real Time PCR le sonde fluorescenti di rivelazione sono immesse direttamente nella miscela di amplificazione, e non sono necessari altri reagenti nè altri passaggi: alla fine dei cicli PCR il Cobas TaqMan 48 elabora i dati delle letture in fluorescenza, traccia e memorizza le curve cinetiche, ne controlla la congruità e infine calcola in pochi secondi i risultati quantitativi.
Il minor numero di passaggi e di reagenti propri della tecnologia Real Time, l’assenza di fluidica e di parti in movimento sull’analizzatore Cobas TaqMan 48 rendono la diagnostica molecolare in PCR più semplice e più affidabile, riducendo nel contempo i rischi di contaminazione, perché l’amplificato rimane confinato in una provetta sigillata, eliminata al termine dei cicli di reazione.
Per garantire la massima riproducibilità e minimizzare i rischi di contaminazione, presso il nostro Centro l'analisi quantitativa di RNA e DNA di campioni clinici su TaqMan 48 viene eseguita previa estrazione automatica su Cobas AmpliPrep.
I test effettuati con questa metodica (virus delle epatiti B e C ed il virus HIV) sono quantitativi, ma caratterizzati da una sensibilità superiore ai test qualitativi che si avvalgono di altre tecnologie. Per HBV l’intervallo di misurazione si estende da 170 ad almeno 8.5x108 copie/ml; per HCV da 30 a 2x108 UI/ml, con sensibilità di 10 UI/ml; per HIV da 40 a 1x107 copie/ml.